WWW.GOLKOM.RU   Добавить в Избранное


БИБЛИОТЕКА ПРИРОДЫ
информационный портал

Главная  Новости  Каталог  Книги  КМЭ  Форум

ТУ  Гербарий  Golkom-Balance  Golkom-Post

 
Регистрация:

Краткая медицинская энциклопедия


А Б В Г Д Е Ж З И Й К Л М Н О П Р С Т У Ф Х Ц Ч Ш Щ Э Ю Я

Серологические исследования

Перейти к следующей статье 'СЕРОПРОФИЛАКТИКА'Перейти к предыдущей статье 'СЕРОВОДОРОД'СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ (лат. serum сыворотка + logos учение) - методы изучения определенных антител или антигенов в сыворотке крови больных, а также выявления антигенов микробов или тканей с целью их идентификации, основанные на реакциях иммунитета. Обнаружение в сыворотке крови больного антител к возбудителю инф. болезни или соответствующего антигена позволяет установить этиол. фактор заболевания. При выделении микроорганизма от больного проводится идентификация возбудителя путем изучения его антигенных свойств с помощью иммунной диагностической сыворотки (так наз. серологическая идентификация микроорганизмов). С. и. применяют также для определения антигенов различных веществ, групп крови, тканевых антигенов и уровня гуморального звена иммунитета. Для выявления иммунных комплексов, образовавшихся при взаимодействии антиген-антитело, используют различные методы (серол. реакции). Различают реакции агглютинации, преципитации, нейтрализации, реакции с участием комплемента, с использованием меченых антител и антигенов.

Реакции aгглютинации - простые по постановке реакции склеивания корпускулярных антигенов (микробов, эритроцитов и других клеток, а также индифферентных корпускулярных частиц с адсорбированными на них антигенами) с помощью антител. Их используют для определения антител в сыворотке крови больных, напр. при брюшном тифе и паратифах (реакция Видаля), бруцеллезе (реакция Райта, Хаддлсона), туляремии и других инф. болезнях, а также для определения возбудителя, выделенного от больного. Для выявления антител к разведениям сыворотки крови больного добавляют взвесь убитых микробов (диагностикум) и через определенное время при t° 35е отмечают наибольшее разведение (т. е. титр) сыворотки, при к-ром произошла агглютинация.

При определении возбудителя ставят ориентировочную реакцию агглютинации на предметном стекле: к капле диагностической иммунной сыворотки в разведении 1:10,1: 20 добавляют чистую культуру возбудителя, выделенного от больного. Если появляется хлопьевидный осадок, реакцию ставят с увеличивающимися разведениями диагностической сыворотки, добавляя в каждую дозу сыворотки 2-3 капли взвеси микробов. Реакцию считают положительной, если агглютинация идет до разведения, близкого к титру диагностической иммунной сыворотки. В контролях (сыворотке, разведенной изотоническим раствором хлорида натрия, или взвеси микробов в том же растворе) осадок в виде хлопьев должен отсутствовать.

Реакция пассивной, или непрямой, гемагглютинации основана на использовании эритроцитов с адсорбированными на их поверхности антигенами или антителами, взаимодействие к-рых с соответствующими антителами или антигенами сыворотки крови больных вызывает выпадение эритроцитов на дне пробирки в виде фестончатого осадка. Реакция применяется в диагностике инф. болезней, для определения гонадотропного гормона в моче при установлении беременности, для выявления повышенной чувствительности больного к лекарственным препаратам и гормонам.

Реакция торможения гемагглютинации основана на способности антител иммунной сыворотки нейтрализовать вирусы, к-рые в результате этого процесса теряют свойство агглютинировать эритроциты. Реакция применяется в диагностике многих вирусных болезней, возбудители к-рых (вирусы гриппа, кори, краснухи, клещевого энцефалита и др. ) могут агглютинировать эритроциты различных животных.

Реакция агглютинации используется также для определения групп крови и резус-фактора. Антитела против резус-фактора эритроцитов являются неполными, поэтому, связываясь с эритроцитами, эти антитела не могут их агглютинировать. Для их выявления дополнительно в реакцию вводят антиглобулиновую сыворотку, содержащую антитела против иммуноглобулинов человека (реакция Кумбса). Антитела антиглобулиновой сыворотки, взаимодействуя с неполными антителами против резус-фактора, адсорбированными на эритроцитах, агглютинируют эритроциты. С помощью реакции Кумбса выявляют как антирезусные антитела, так и резус-фактор; диагностируют гемолитическую болезнь новорожденных, эритроциты к-рых соединяются с циркулирующими в крови неполными антителами против резус-фактора.

Разновидностью реакции агглютинации является коагглютинация - реакция, в к-рой антигены возбудителя определяют с помощью стафилококков, предварительно обработанных иммунной диагностической сывороткой. Стафилококки, содержащие протеин А., неспецифически адсорбируют антимикробные антитела, к-рые взаимодействуют активными центрами с соответствующими микробами, выделенными от больных. В результате коагглютинации происходит образование хлопьев, состоящих из стафилококков, антител диагностической сыворотки и определяемого микроба.

Реакции преципитации - осаждение комплекса антиген-антитело, образующегося в результате соединения растворимого антигена со специфическими антителами. Осадок комплекса антиген-антитело называется преципитатом. Реакцию ставят в пробирке путем нанесения (наслоения) раствора антигена на иммунную сыворотку. При оптимальном соотношении антиген-антитело на границе этих растворов образуется непрозрачное кольцо преципитата (реакция кольцепреципитации). Широкое распространение получила реакция преципитации в полужидком геле агара или агарозы - двойная иммунодиффузия по Оухтерлоню, радиальная иммунодиффузия, иммуноэлектрофорез и др. Для постановки иммунодиффузии по Оухтерлоню растопленный агаровый гель выливают тонким слоем на стеклянную пластинку и после затвердевания геля в нем вырезают лунки размером 2-3 мм. В противоположные лунки раздельно помещают антигены и иммунные сыворотки, к-рые, диффундируя в агар, образуют в месте встречи преципитат в виде белой полосы. В реакции радиальной иммунодиф-фузии иммунную сыворотку вносят в агаровый гель. В лунки геля помещают раствор антигена, к-рый, диффундируя в гель, образует кольцевые зоны преципитации вокруг лунок. Диаметр кольца преципитации пропорционален концентрации антигена. Реакцию используют, в частности, для определения содержания в крови иммуноглобулинов различных классов, компонентов системы комплемента. Иммуноэлектрофорез сочетает электрофорез и иммунопреципитацию: смесь антигенов разделяется в геле с помощью электрофореза, затем параллельно зонам электрофореза вносится иммунная сыворотка, антитела к-рой диффундируют в гель и образуют в месте встречи с антигеном линии преципитации.

Реакция нейтрализации. Антитела иммунной сыворотки способны нейтрализовать повреждающее действие микроорганизмов или их токсинов на чувствительные клетки и ткани. Это связано с блокадой микробных антигенов антителами, т. е. их нейтрализацией. Реакцию ставят путем введения смеси антиген-антитело животным или внесения ее в культуру клеток. При отсутствии повреждающего действия микробов или их антигенов, токсинов говорят о нейтрализующем действии иммунной сыворотки и, следовательно, специфичности взаимодействия комплекса антиген-антитело.

Реакции с участием комплемента основаны на активации комплемента в результате присоединения его к антителам, находящимся в комплексе с антигеном (реакции связывания комплемента, радиального гемолиза и др. ). Реакция связывания комплемента двухфазная; первая фаза - инкубация смеси искомого антигена (или антитела) с диагностической сывороткой (или антигеном-диагностикумом) и комплементом; вторая фаза - индикаторная - определение наличия в смеси свободного комплемента путем добавления гемолитической системы, состоящей из эритроцитов барана и гемолитической сыворотки, содержащей антитела против эритроцитов барана. В первой фазе реакции при образовании комплекса антиген-антитело происходит связывание им комплемента, во второй фазе гемолиз сенсибилизированных антителами эритроцитов отсутствует (реакция положительная). При отрицательной реакции, если антиген и антитело не соответствуют друг другу, комплемент остается свободным и во второй фазе реакции присоединяется к комплексу эритроцит-антиэритроцитарное антитело гемолитической сыворотки, вызывая гемолиз. Реакция связывания комплемента применяется для диагностики инф. болезней, в частности сифилиса (см. Вассермана реакция).

Реакцию радиального гемолиза ставят в геле агара, содержащем эритроциты барана и комплемент. После внесения в лунки геля гемолитической сыворотки вокруг них в результате радиальной диффузии антител образуется зона гемолиза, размеры к-рой пропорциональны титру сыворотки. Таким образом можно определить активность комплемента и гемолитической сыворотки, а также антитела в сыворотке крови больных гриппом, краснухой, клещевым энцефалитом. Для этого на эритроцитах адсорбируют соответствующие антигены вируса, а в лунки геля с данными эритроцитами добавляют сыворотку крови больного. Противовирусные антитела взаимодействуют с вирусными антигенами, адсорбированными на эритроцитах, после чего к этому комплексу присоединяются компоненты комплемента, вызывая гемолиз. Реакция радиального гемолиза применяется для определении антителообразования.

Иммунное прилипание - реакция, основанная на активации системы комплемента корпускулярными антигенами (бактериями, вирусами), обработанными иммунной сывороткой. В результате образуется активированный третий компонент комплемента (СЗb), к-рый присоединяется к корпускулярному антигену в составе иммунного комплекса. На эритроцитах, тромбоцитах, макрофагах имеются рецепторы для СЗb, благодаря чему при смешивании этих клеток с иммунными комплексами, несущими СЗb, происходят их соединение и агглютинация.

Активация комплемента при наличии антител на поверхности микробов способствует фагоцитозу возбудителей фагоцитами, имеющими рецепторы к СЗb и антителам. Т. о., изучая фагоцитарную реакцию, можно косвенно охарактеризовать активность комплемента и антител.

Реакция с использованием меченых антител или антигенов. Иммунофлюоресценция (метод Кунса) основана на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, меченными флюорохромами, способны светиться в ультрафиолетовых лучах люминесцентного микроскопа. Бактерии в мазке, обработанные такой специфической сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета. Различают три основные разновидности метода: прямой, непрямой, непрямой с комплементом.

Иммуноферментный, или энзим-иммунологический, метод (реакция энзим-меченых антител) - выявление антигенов с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом (пероксидазой хрена или щелочной фосфатазой). После соединения антигена с меченной ферментом иммунной сывороткой добавляют субстрат, к-рый расщепляется ферментом с окрашиванием раствора в желто-коричневый (пероксидаза) или желто-зеленый (фосфатаза) цвет. Наиболее распространен твердофазный иммуноферментный метод. На твердом носителе, напр. в лунках микропанелей, сорбируют антиген. В лунки с адсорбированным антигеном добавляют сыворотку крови больного и затем антиглобулиновую (противочеловеческую) сыворотку, меченную ферментом, и субстрат для фермента. При положительном результате изменяется цвет раствора в лунках. Твердофазный носитель можно сенсибилизировать не только антигеном, но и антителами. Тогда в лунки с сорбированными антителами вносят искомый антиген, добавляют иммунную сыворотку против антигена, меченную ферментом, затем субстрат для фермента. Иммуноферментный метод применяется для диагностики вирусных, бактериальных и паразитарных заболеваний.

Радиоиммунологический метод - количественное определение антител или антигенов, меченных радионуклидом, с применением аналогичных антител или антигенов: напр., искомого антигена с применением иммунной сыворотки и аналогичного антигена, меченного радионуклидом. После их взаимодействия отделяют образовавшийся радиоактивный комплекс антиген-антитело и определяют его радиоактивность по счетчику импульсов: количество меченого антигена, связавшегося с антителами, обратно пропорционально количеству искомого антигена. Широкое распространение получили так наз. прямой и непрямой варианты твердофазного радиоиммунол. метода, при к-рых используют полистироловые плашки с адсорбированными антигенами либо антителами. Метод применяют для выявления антигенов микробов, определения гормонов, ферментов, лекарственных веществ и иммуноглобулинов.


Краткая Медицинская Энциклопедия, издательство "Советская Энциклопедия", издание второе, 1989, Москва


Поделитесь в социальных сетях:








Рейтинг@Mail.ru
Главная  Новости  Каталог  Книги  КМЭ  Форум

ТУ  Гербарий  Golkom-Balance  Golkom-Post


Copyright © 2002-2017 "Библиотека природы"
По вопросам размещения рекламы на сайте: info@golkom.ru


Rambler's Top100